国产精品日韩欧美在线观看-午夜福利精品人妻久久潮喷-蜜臀av一区二区三区绯色-av中文字幕一区二区在线

捷世康生物是一家專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的“新星”企業(yè),產(chǎn)品及代理品牌產(chǎn)品范圍涵蓋了分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)免疫學(xué)、生物化學(xué)等生命科學(xué)相關(guān)領(lǐng)域及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室消耗品

品牌中心更多>>

熱賣產(chǎn)品

技術(shù)文獻(xiàn)

蛋白質(zhì)含量的測(cè)定——紫外(uv)吸收測(cè)定法

點(diǎn)擊次數(shù):1479 日期:2016/6/13 8:44:30

蛋白質(zhì)含量的測(cè)定——紫外(uv)吸收測(cè)定法
目的要求
1、了解紫外吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的原理。
2、掌握紫外分光光度計(jì)的使用方法。
實(shí)驗(yàn)原理
    蛋白質(zhì)分子中所含酪氨酸和色氨酸殘基的苯環(huán)含有共軛雙鍵,使蛋白質(zhì)在280nm波長(zhǎng)處有最大吸收值。在一定濃度范圍內(nèi),蛋白質(zhì)溶液的光吸收值(A280)與其含量成正比關(guān)系,可用作定量測(cè)定。
    紫外線吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的優(yōu)點(diǎn)是迅速,簡(jiǎn)便,不消耗樣品,低濃度鹽類不干擾測(cè)定。因此,廣泛應(yīng)用在柱層析分離中蛋白質(zhì)洗脫情況的檢測(cè)。此法的缺點(diǎn)是:1、對(duì)于測(cè)定的那些與標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)中酪氨酸和色氨酸含量差異較大的蛋白質(zhì),有一定的誤差;2、若樣品中核酸等吸收紫外線的物質(zhì),會(huì)出現(xiàn)較大的干擾。
    不同的蛋白質(zhì)和核酸的紫外線吸收是不同的,即使經(jīng)過校正,測(cè)定結(jié)果也還存在一定的誤差。但是可作為初步定量的依據(jù)。該法可測(cè)定蛋白范圍應(yīng)在0.1~1.0mg/mL。
試劑和器材
1、標(biāo)準(zhǔn)和待測(cè)蛋白質(zhì)溶液
(1)、標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液。結(jié)晶牛血清蛋白,預(yù)先經(jīng)微量凱氏定氮法測(cè)定蛋白氮含量,根據(jù)其純度配制成1mg/ml蛋白溶液。
(2)、待測(cè)蛋白質(zhì)溶液。人血清,使用前稀釋100倍。
2、器材
試管1.5cm×15cm(×9),試管架,移液管1mL(×3);2mL(×2);5mL(×2);分光光度計(jì)。
操作方法
1、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線
   取8支試管編號(hào),分別向每支試管加入各種試劑,搖勻。選用光程為1cm的石英比色杯,在280nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定各管溶液的A280值。以A280值為縱坐標(biāo),蛋白質(zhì)濃度為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2、樣品測(cè)定
    取待測(cè)蛋白質(zhì)溶液1mL,加入蒸餾水3mL搖勻,按上述方法在280nm波長(zhǎng)處測(cè)定光吸收值,并從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出待測(cè)蛋白質(zhì)的濃度。
注意事項(xiàng)
    由于各種蛋白質(zhì)含有不同量的酪氨酸和苯丙氨酸,顯色的深淺往往隨不同的蛋白質(zhì)而變化。因而本測(cè)定法通常只適用于測(cè)定蛋白質(zhì)的相對(duì)濃度(相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì))。此外,蛋白溶液中存在核酸或核苷酸時(shí)也會(huì)影響紫外吸收法測(cè)定蛋白質(zhì)含量的準(zhǔn)確性。

原創(chuàng)作者:青島捷世康生物科技有限公司

掃一掃,關(guān)注手機(jī)網(wǎng)站!!!

收縮
請(qǐng)掃一掃!